Tests d'endotoxines et de stérilité des peptides de recherche
La contamination par les endotoxines est l'une des causes cachées les plus courantes de données peu fiables dans la recherche sur les peptides, en particulier en culture cellulaire. Un peptide peut être pur à 99% selon la HPLC et contenir malgré tout suffisamment d'endotoxines pour fausser une expérience.
Ce guide explique ce que sont les endotoxines, pourquoi elles sont importantes, comment on les mesure et comment lire les résultats d'endotoxines et de stérilité sur un certificat d'analyse.
Sur cette page
Ce que sont les endotoxines
Les endotoxines sont des lipopolysaccharides (LPS), de grosses molécules issues de la membrane externe des bactéries à Gram négatif. Elles sont libérées lorsque les cellules bactériennes meurent et se désagrègent. Point essentiel : les endotoxines sont thermostables et chimiquement robustes. Éliminer ou tuer les bactéries ne supprime pas l'endotoxine qu'elles laissent derrière elles.
C'est pourquoi un échantillon peut être stérile (exempt d'organismes vivants) et contenir malgré tout des endotoxines. Ce sont deux problèmes distincts qui nécessitent des tests distincts.
Pourquoi les endotoxines comptent pour la recherche
Les endotoxines sont de puissants activateurs du système immunitaire. En culture cellulaire et en recherche immunologique, de faibles quantités suffisent à déclencher la libération de cytokines, à activer des voies de signalisation et à modifier les mesures expérimentales. Un peptide contaminé par des endotoxines introduit une variable qui n'a rien à voir avec le composé étudié, et elle reste invisible sans test. Pour les travaux sensibles, l'endotoxine est l'un des contaminants les plus importants à écarter.
Le test LAL
L'endotoxine se mesure le plus souvent avec le test LAL (lysat d'amébocytes de limule), qui utilise un réactif réagissant en présence d'endotoxine. Les résultats sont exprimés en unités d'endotoxine par milligramme (EU/mg), une valeur plus faible étant préférable. Une alternative moderne et sans recours aux animaux, fondée sur le facteur C recombinant, est de plus en plus utilisée et mesure la même chose.
Les tests de stérilité
Les tests de stérilité constituent le contrôle distinct de la présence de bactéries et de champignons viables dans l'échantillon. Le résultat est généralement rapporté sous forme de simple conforme ou non conforme. Les tests de stérilité et d'endotoxines réunis donnent une image plus complète de la qualité microbiologique que l'un ou l'autre pris isolément.
Lire les résultats sur un CoA
Sur un certificat d'analyse, recherchez un résultat d'endotoxines en EU/mg et une ligne de conformité ou non-conformité pour la stérilité. Une valeur plus faible en EU/mg indique une matière plus propre. Un CoA qui inclut les deux protège vos données bien mieux qu'un document indiquant uniquement la pureté. Pour une explication complète du document, consultez notre guide sur comment lire un certificat d'analyse de peptide.
Comment RetaNord procède
Les tests de stérilité et d'endotoxines (LAL) constituent l'une des cinq étapes que chaque lot RetaNord franchit avant sa libération, aux côtés de la pureté HPLC, de l'identité par spectrométrie de masse et des contrôles de stabilité et de constance. Les résultats sont consignés sur le certificat d'analyse spécifique au lot joint à chaque commande.
Foire aux questions
Quelle est la différence entre les tests de stérilité et d'endotoxines ?
Les tests de stérilité recherchent des bactéries et des champignons vivants. Les tests d'endotoxines mesurent les toxines bactériennes (lipopolysaccharides), qui sont thermostables et peuvent subsister même après la disparition des bactéries. Un échantillon peut être stérile et contenir malgré tout des endotoxines, c'est pourquoi les deux tests sont importants.
Que signifie EU/mg ?
EU/mg signifie unités d'endotoxine par milligramme, le résultat du test d'endotoxines LAL. Cette valeur quantifie la contamination par les endotoxines, et une valeur plus faible indique une matière plus propre.
Pourquoi les endotoxines importent-elles si un peptide est pur à 99% ?
La pureté HPLC mesure la fraction peptidique, et non les contaminants microbiens. Un peptide peut être pur à 99% et contenir malgré tout des endotoxines, qui peuvent fausser indépendamment les expériences de culture cellulaire et d'immunologie.